在體內(nèi)，各種其他參數(shù)對傷口愈合的影響更大，例如不同細胞類型的相互作用。 使用 Culture-Insert插件的體外 ibidi 傷口愈合實驗將遷移速度與所有這些其他影響分開，提供了一個客觀且可重復(fù)的實驗環(huán)境。

　　1、Culture-Inserts插件可以重復(fù)使用嗎？　　

　　盡管 Culture-Inserts 插件中的材料可高壓滅菌并且與酒精相容，但我們不建議重復(fù)使用。 如果您仍想嘗試重復(fù)使用，則需要建立一個用酸或堿的清潔程序。 ibidi沒有任何清潔Culture-Inserts插件的經(jīng)驗，雖然它們可能會保持粘性，但之前實驗的殘留可能會影響重現(xiàn)性。

　　2、可否在蓋玻片上使用 Culture-Inserts插件嗎？　　

　　可以，您可以在任何蓋玻片上使用 Culture-Inserts插件。 到目前為止，還沒被報告與任何干燥表面不相容。

　　3、是否可以使用 Culture-Insert 插件制作小于 500 µm 的傷口？　　

　　不可以，Culture-Inserts 插件中最小和標準的傷口尺寸是 500 µm。 Culture-Insert 4 Well /4孔插件會有一個額外的中心間隙，傷口大小為 1000 µm。

　　4、Culture-Insert 插件是如何固定在培養(yǎng)皿上的？　　

　　Culture-Insert 插件由生物相容的硅膠材料制成。 硅膠底部有一個粘性表面，可粘附（粘）在任何平坦、干燥、均勻的表面。 這種材料足夠柔軟可粘到表面上。 您可以用無菌鑷子按壓插件來簡單地修復(fù)它?！　?/p>

　　5、您是否曾經(jīng)遇到過 Culture-Inserts 插件無法粘附在定制涂層表面上的問題？　　

　　只要表面干燥，我們從未遇到過讓 Culture-Inserts 插件粘附在定制涂層表面上的任何問題。 但是，潮濕的表面會導(dǎo)致泄漏。 因此，請確保您的定制涂層表面*干燥。

　　6、需要在 Culture-Insert 插件中播種多少個細胞才能進行細胞遷移實驗？　　

　　開始遷移實驗時，Culture-Insert 插件中的細胞層應(yīng)融合。 在所有實驗中，匯合細胞層的密度應(yīng)盡可能一致。 使用的接種細胞數(shù)量取決于您的細胞類型，因此您可以在 Culture-Insert 2 Well 說明書中找到推薦的范圍和詳細方案。

　　7、為什么移除 ibidi Culture-Insert 插件后細胞有時會從蓋玻片上脫落？　　

　　以下是解釋細胞脫離的一些可能原因：　　

　　• 細胞密度太高。 --> 播種更少的細胞（細胞層應(yīng)在 24 小時后生長至  融合，但不能過度生長）。有關(guān)傷口愈合試驗的詳細方案，請參閱：傷口愈合／細胞劃痕實驗新方法－如何劃出筆直均一的劃痕　　

　　• 細胞正在挨餓。 --> 增加每個插入孔的培養(yǎng)基體積，或在細胞生長期間更換培養(yǎng)基?！　?/p>

　　• 在極少數(shù)情況下，細胞類型不能很好地粘附在 ibiTreat 表面。 --> 首先，覆蓋蓋玻片表面以促進細胞附著。然后，在插入 ibidi Culture-Insert 插件之前讓涂層干燥?！　?/p>

　　以下是使用帶有涂層的 ibidi Culture-Inserts 插件以促進細胞粘附的一些額外提示：　　

　　• 我們強烈建議提前測試移除ibidi Culture-Insert 插件是否會破壞遷移間隙中的涂層。這可以通過使用針對涂層蛋白的熒光標記抗體進行分析。如果遷移間隙區(qū)域中涂層的熒光信號與開放孔中的一樣均勻和強烈，則可以假設(shè)在插入物移除后是保持完好的。經(jīng)過幾次成功的測試后進行實際實驗通常是安全的?！?/p>

　　• 如果去除插入物破壞了大部分涂層，則僅涂覆插件的孔，然后接種細胞。取出插件后，通過向培養(yǎng)基中添加低濃度涂層來填充間隙并孵育約 30 分鐘。之后，用普通介質(zhì)替換涂層溶液并繼續(xù)進行遷移實驗。　　

　　8、當(dāng) Culture-Insert變干燥時，包被蛋白會失去活性嗎？　　

　　這主要取決于與 Culture-Insert 插件一起使用的蛋白質(zhì)類型。 使用層粘連蛋白的人通常更喜歡在涂層和細胞接種之間保持水分。 根據(jù)我們的經(jīng)驗，當(dāng)纖連蛋白和膠原蛋白 IV 干燥時，我們沒有發(fā)現(xiàn)對細胞遷移速度有任何影響。

　　9、有沒有辦法用懸液細胞進行傷口愈合實驗，或者該實驗僅適用于貼壁細胞？　　

　　目前，使用 Culture-Insert插件的傷口愈合實驗只能用于貼壁細胞。 然而，單個細胞的遷移研究可以在 µ-Slide 趨化性中通過將細胞嵌入到3D基質(zhì)（例如，I 型膠原蛋白凝膠）中進行。

　　10、是什么使 Culture-Inserts插件在細胞接種過程中不會泄漏？　　

　　Culture-Insert 插件由硅膠材料制成。 上部是粗料，下部是非常柔軟的材料，在按下 Culture-Insert 插件后會固定在表面上。 正確插入時是不會有任何泄漏的?！　?/p>

　　11、有時很難在 Culture-Insert 插件中看到細胞層的匯合。 您有什么建議？　　

　　當(dāng)使用相差顯微鏡和小孔時，例如 Culture-Insert 插件或 96 孔板，空氣-水界面之間的彎月面會導(dǎo)致表面強烈彎曲。 這會破壞除孔中心以外的任何地方的相位對比效應(yīng)?！　?/p>

　　一種解決方案是用細胞培養(yǎng)基*均勻地填充 Culture-Insert 的兩個孔。 通過這樣做，您可以在孔上方的介質(zhì)和空氣之間創(chuàng)建一個平面。 請記住，這可能會導(dǎo)致兩孔之間的交叉污染。

　　12、有時，細胞傾向于聚集在 ibidi Culture-Insert插件的邊緣。 怎樣才能避免這種情況？　　

　　當(dāng)細胞在 Culture-Insert插件中生長到非常高的密度時，會觀察到了這種情況。 為了減少細胞團塊，您應(yīng)該在實驗開始時使用較低的細胞密度。 然而，有時細胞會粘在與細胞相容的硅膠上。 在這種情況下，我們建議較少孵育時間和/或細胞數(shù)量。

　　13、Culture-Insert 如何在不造成細胞損傷的情況下模擬生理傷口？　　

　　使用體外實驗時，很難以可重復(fù)的方式模擬生理傷口。 當(dāng)然，來自死細胞的碎片可能在與傷口愈合相關(guān)的遷移中發(fā)揮作用。 使用 Culture-Insert插件的 ibidi 傷口愈合實驗提供了可重復(fù)的、無損傷的細胞貼片。